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    新聞詳情

    關于臺式離心機的細胞培養操作技術

    日期:2020-10-12 08:08
    瀏覽次數:460
    摘要:經過臺式離心機進行腎單層細胞培育操作技能 安排培育便是將安排或細胞從機體取出,用人工辦法培育使安排或細腦在體外得以生存、成長和繁衍。安排培育分為器官培育、安排塊培育和細胞培育。現在作業中應用較廣的是細胞培育。常用于病毒病的診斷和生物藥品(疫苗、診斷抗原等)的出產。 安排培育的辦法很多,大體分為懸浮培育和固定培育兩類。懸浮培育是將切碎的安排塊經過臺式離心機進行離心別離,然后將經過臺式離心機別離出來的渙散的細胞放在恰當的培育液中,讓其浮游于液體小進行培育,然后接種病毒。 另外還有固定培育法是使安排塊...
    經過臺式離心機進行腎單層細胞培育操作技能
    安排培育便是將安排或細胞從機體取出,用人工辦法培育使安排或細腦在體外得以生存、成長和繁衍。安排培育分為器官培育、安排塊培育和細胞培育。現在作業中應用較廣的是細胞培育。常用于病毒病的診斷和生物藥品(疫苗、診斷抗原等)的出產。
    安排培育的辦法很多,大體分為懸浮培育和固定培育兩類。懸浮培育是將切碎的安排塊經過臺式離心機進行離心別離,然后將經過臺式離心機別離出來的渙散的細胞放在恰當的培育液中,讓其浮游于液體小進行培育,然后接種病毒。
    另外還有固定培育法是使安排塊經過臺式離心機渙散的細胞粘附與容器壁上進行培育,待細胞成長杰出后接種病毒。病毒在安排培育細胞中繁衍的首要標志是細胞病變(壞死、崩解、脫落等),細胞融合或構成包涵體,對紅細胞的吸附作用等。
    下面簡略介紹經過臺式離心機進行“腎單層細胞培育”的一般操作技能。
    1.取腎:用無菌操作取出斷乳前后幼齡動物的腎臟置**平皿中,剪去留的被膜和脂肪,并縱向切成兩半,剪去腎的被膜和脂肪,并縱向切成兩半,剪去腎盂及髓質部分,用含雙抗(指青、鏈霉素,下同)的漢克氏液洗凈,移置小燒杯中,剪成乳糜狀,再用漢克氏液洗2—3次,至液體澄清無血細胞停止。
    2.消化;參加10倍的0.125%胰酶液進行消化。有熱消化法(在37℃水浴中)和冷消化法(在4℃冰箱中)兩種。消化的時刻依據不同的安排細胞和所用胰酶的活性而定,直至聚成絮狀的腎安排又渙散開。取出傾去胰酶,用漢克氏液洗刷數次,然后參加少數乳漢液,用吸管進行吹打(即吸入和吹出)10-20次,使安排渙散為細胞。將渙散的細胞經2—3層**紗布過濾,取濾液置于臺式離心機中以1500轉/別離心十分鐘,棄去上清液,加適昆乳漢液混勻,再次經過臺式離心機離心,*終參加乳漢液使細胞懸浮其中,收集于**三角瓶中。
    3.細胞計數和分裝:取已制好的細胞懸浮液,用計數白細胞的辦法計數,依據計數結果,用營養液(pH6.8—7.0)稀釋為每毫升含50-60萬細胞,分裝于小扁瓶中(容量約50毫升的扁瓶加懸液約5毫升),也可分裝在鏈霉素小瓶中。
    4.培育:在37℃培育,3—4天即可粘附瓶壁構成單層細胞,今后每過3—4大替換一次堅持液。
    5.接毒;將病料剪碎,按1:4加含雙抗的漢克氏液研磨成乳糜狀,經凍融處理使細胞破碎,病毒充分開釋,用臺式離心機,將轉速控制在3000轉/分左右離心15分鐘,將上清液接種到已成長單層細胞的培育瓶中,在37℃溫箱中吸附30-60分鐘,然后參加堅持液持續培育。
    6.收成病毒:每日或隔日用低倍顯微鏡調查細胞病變狀況,當有50-75%細胞呈現病變隊時可收集培育瓶中液體,從放在冰箱(-20℃)中保存,此即繁衍的病毒液。
    注意事項:培育皿及其他運用用具的潔凈、臺式離心機的運用、水的質量、酸堿度、無菌操作等,都是關系到安排培育勝敗的重要問題,必須嚴格規則的要求去做。
    臺式低速離心機別離技能是依據顆粒在一個有用離心場合中的狀況而發展起來的新技能。離心別離技能也閱歷了數代替換,有低速醫用離心機,高速離心機,超速離心機到超速冷凍離心機,超大容量冷凍離心機等。
    1、主電源指示燈不亮時,查看指示燈保險絲及室內配電板保險絲是否熔斷,同時查看電源線是否觸摸杰出,如保險絲斷則應替換保險絲并堅持電路疏通。
    2 軸承損壞或轉動受阻,軸承內缺油或軸承內有塵垢較多而引起摩擦阻力增大,電機達不到額定轉速,應及時清洗或替換軸承。
    3、整流子表面有一層氧化物,甚至燒成高低不平與整流子外緣不符合也可使轉速下降,應整理整流子,使其觸摸杰出。
    4、如轉子線圈中短路或斷路,可用萬用表查看。轉子在運用時可因金屬疲勞、超速、過應力、化學腐蝕、挑選不妥、運用中回頭不平衡及溫度失控等原因而導致離心管破裂,樣品滲漏,轉子損壞。
    首先將臺式低速離心機所配離心管參加需別離的物質,別離插入離心頭孔中。(但每支離心管所加物質其數量必須基本持平)合上蓋板、接通電源、打開電源開關,電源指示燈亮,然后將“選時”器選至你需要離心作業時刻,此時臺式低速離心機即進入作業狀況,調速為離心速度挑選,其作業狀況為500~6000轉/分左右。可依據實際需要自行挑選恰當方位。
    不同密度、大小或形狀的顆粒在不同速度的離心場合中沉降,所以一個大體是球形非均一的混合物,可以用離心的辦法加以別離,臺式低速離心機是為了進一步研討生物化學、別離大量的物質。
    1清潔離心機腔體和回頭,并擦干腔內冷凝水。
    2運用完后要打開門,直至腔內恢復常溫。
    3離心之前要平衡樣品。
    4離心之后要注意**和**。
    5回頭的維護和存放,注意維護底部的計數環。


    滬公網安備 31011802002412號

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